西安药物治疗自噬

关于自噬的检测，虽然Autophagy每几年就发一个指南，但各种检测方法众说纷纭，所以目前倾向于多证据支持的结果。形态学自然是电镜看到自噬泡，但电镜毕竟是瞬时状态的捕捉，个人认为对于自噬这种动态持续性过程的检测比较鸡肋。还有一个常用的就是GFP-LC3转染，现在有了更好的RFP-GFP-LC3双标，目的是为了区分自噬体和自噬溶酶体（因为酸性环境会使绿荧光猝灭，具体原理不详说了），这样可以观察到自噬潮，还是比较靠谱的方法。下来就是经典的LC3，它可是自噬泡必不可少的部分，自然被用来检测自噬，LC3分I和II，其实是一种翻译后修饰过程，I与磷脂酰丝氨酸结合就成了II，自噬时游离型I与PE结合成为膜型的II，因此检测LC3的表达也是说明自噬的方法，但指南建议要与自噬阻止剂联合，也就是设几个对照，检测到自噬流。以前还有人用MDC，丫腚橙（好像不是这么写的）去染自噬泡，但特异性不高比较少用了。再就是自噬基因ATG的检测。个人觉得想说明自噬发生不难，但说清楚说明白就比较难了。在整个自体吞噬过程中,细胞质和细胞器都受到破坏,较明显的是线粒体和内质网受损。西安药物治疗自噬

细胞自噬与凋亡的交互作用：细胞死亡是被周密调控的复杂过程。凋亡，作为第1个被认定的程序性细胞死亡程序(programmedcelldeath,PCD)，其作用及调控网络已逐渐清晰。然而，凋亡并非决定细胞死亡命运的唯独。近年，被称作Ⅱ型PCD的细胞自噬被证实与凋亡共同调控细胞死亡。某些情况下，自噬阻止凋亡，是细胞的存活途径，但自噬本身也会诱发细胞死亡，或与凋亡共同作用及在凋亡缺陷的情况下作为备份机制诱导细胞死亡。二者通路相互关联，互为调控。研究并利用这些交互作用，将有利于进一步揭示**等疾病的发生了发展机制。青岛双荧光自噬慢病毒当自噬体与溶酶体融合后，形成自噬溶酶体。

与凋亡（在**细胞中一般都存在缺限）不同，自噬是被优先保留的。无论是**细胞还是正常细胞，保持一种基础、低水平的自噬活性是至关重要的。因为细胞中随时产生的「垃圾」（破损或衰老的细胞器、长寿命蛋白质、错误合成或折叠错误的蛋白质等等）都需要及时清理，而这主要靠自噬来完成，因此，自噬具有维持细胞自稳的功能；如果将自噬相关基因突变失活，如神经元会发生大量聚集蛋白，并出现神经元退化。同时，自噬的产物，如氨基酸、脂肪酸等小分子物质又可为细胞提供一定的能量和合成底物，可以说，自噬就是一个备用仓库。

自噬是维持细胞内环境稳定的重要机制，是细胞在营养缺乏通过自我消化蛋白质和细胞器循环利用能量以维持稳态平衡的过程。自噬相关基因功能缺失突变可导致自发性瘤子，因此自噬失调被认为是病症发展的重要机制之一。肺病是发病率和死亡率增长较快，对人群健康和生命威胁较大的恶性瘤子之一。其中，非小细胞肺病（NSCLC）是较常见的肺病类型，占所有肺病的80%。大多数NSCLC细胞的表皮生长因子受体（EGFR）的酪氨酸激酶结构域中存在特异性唤醒突变。在NSCLC中，唤醒的EGFR通过酪氨酸磷酸化的自噬基因6(BECN1)阻止自噬而促进瘤子进展。目前人们正在进行紧张的研究以开发药物，能够在各种疾病中影响自噬机制。

研究发现，再灌注阶段心肌细胞中溶酶体的数量和功能明显下降，导致自噬流被部分阻断，心肌细胞对自噬小体的清理能力降低，过量自噬小体的堆积导致心肌细胞大量死亡；同时伴随溶酶体膜蛋白LAPTM4B水平的下调。进一步研究发现，LAPTM4B对溶酶体数量和功能的维持是必须的。LAPTM4B-/-小鼠I/R心肌溶酶体数量进一步减少、自噬小体堆积加重，心肌梗死面积加大；LAPTM4B过表达可以逆转心肌I/R导致的这些表型，但其心肌保护作用可被溶酶体功能阻止剂取消，提示LAPTM4B可通过提升I/R中溶酶体数量和功能减少自噬小体累积，进而发挥心肌保护作用。进一步分析揭示，LAPTM4B可通过其E3区域与mTOR蛋白结合阻止I/R所引起的mTORC1复合物唤醒，促进溶酶体关键转录因子TFEB的核转位，从而协助溶酶体功能和膜稳定性维持，提升心肌细胞抵抗I/R损伤的能力。自噬性溶酶体大量增加，因此对细胞的损伤起一种保护作用。黑龙江细胞自噬

自噬过程与内涵体途径密不可分。西安药物治疗自噬

细胞经诱导或阻止后，需对自噬过程进行观察和检测，常用的策略和技术有：1、利用WesternBlot检测LC3-II/I比值的变化以评价自噬形成自噬形成时，胞浆型LC3（即LC3-I）会酶解掉一小段多肽，转变为（自噬体）膜型（即LC3-II），因此，LC3-II/I比值的大小可估计自噬水平的高低。（注意：LC3抗体对LC3-II有更高的亲和力，会造成假阳性。方法2和3需结合使用，同时需考虑溶酶体活性的影响。）2、检测长寿蛋白的批量降解：非特异。3、MDC（Monodansylcadaverine，单丹磺酰尸胺）染色：包括自噬体，所有酸性液泡都被染色，故属于非特异性的。4、CellTrackerTMGreen染色：主要用于双染色，但其能染所有的液泡，故也属于非特异性的。西安药物治疗自噬

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